陸時羨聞言一笑,透露出一絲神秘的氣息:“說出來就沒意思了,你們可以猜猜看。”
幾人你看看我,我看看你,眼中都是好奇和探究。
對他話里的真實性倒是一點沒有懷疑。
因為他們對陸時羨的信任,早已經在長時間的相處中得到了多次驗證。
時間緊急,任務繁重。
幾個人心里都清楚接下來的時間可能不會輕松了。
但也都做好了苦戰得心理準備。
做科研不耐得了寂寞是不行的。
不過陸時羨發現一向顯得理智的梅林此時居然顯得有些亢奮。
他好笑地搖搖頭,忽然想到一句話:“如果沒有旺盛的好奇心和純粹的求知欲為動力,就不可能產生那些對人類和社會具有巨大價值的發明創造。”
在這個角度上,他認為梅林和他是一路人。
沒有多余的寒暄,也沒有多余的解釋。
四人默契地回到實驗室。
陸時羨站在操作臺前直入主題。
“接下來,可能大家要辛苦一點,將所有測序的準備工作做好,然后所有的測序流程由我來操作。”
“梅林、瑟琳和鮑勃你們分別負責DNA提取、文庫構建和引物連接的預處理操作。”
“這個工作結束之后,你們可以看我的操作,有什么不懂的都可以問我。”
聞言,三人皆是點頭,沒有異議。
這個安排和他們預想的差不太多。
只不過就是測序儀只有一臺,又只有陸時羨一個人操作。
相較于預處理,陸時羨的工作就顯得更繁復。
三代測序技術其實也就是單分子測序技術,它能夠直接讀取單DNA分子的序列信息,從而規避掉PCR擴增和文庫擴增帶來的風險。
但沒有完美的技術,這項技術區別于高通量測序技術的缺點是測序信息量大且非常復雜,在測序過程中對精力的消耗是很大的。
三人仿佛已經看見陸時羨即將爆肝的樣子,心中都是對他發際線的憐憫。
但他們對陸時羨的想法一無所知。
接下來,幾人都陷入了緊張而有序的忙碌之中。
預處理看似只是測序的基礎,但也不是隨便來個人就能做的。
他們這臺測序儀運用的是SMRT測序技術,它是利用DNA多聚酶在放射線觀測下合成DNA,從而觀察到DNA的添加情況,以此得到DNA的序列信息。
文庫制備是預處理工作中最復雜的一環,需要對基因組的DNA進行片段化的末端修復。
這個操作類似于進行最精密的手術,需要將發夾式的接頭連接到雙鏈DNA分子兩端,然后形成一個封閉的圓圈。
再將引物和聚合酶退火到接頭上,最后就能形成一個啞鈴狀的待測序文庫。
光是這個流程就耽誤了三四天的時間。
三個人經過現學,然后依次進行了操作。
最后的結果讓陸時羨很是意外。
在這種精細實驗操作上,鮑勃的表現居然比作為女生的瑟琳還要好。
綜合制備時間和效果,他得到的文庫經過查驗之后標準程度比較高。
雖然和陸時羨親手制備的還比不了,但用來進行測序已經是基本滿足要求了。
看著幾人都是詫異地望著自己,鮑勃雖然也很意外,但在臉上毫無顯現,然后驕傲地抬起頭。
“看什么?”
“難道不允許我偷偷努力,然后驚艷所有人嗎?”
不過,都是朝夕相處的隊友,彼此什么習慣和水平都清楚。
估計是瞎貓碰上死耗子,但梅林和瑟琳沒好意思去打擊他。
“我假裝信了。”陸時羨嘴上說著,心中還是比較開心的。
一個團隊如果一直只靠固定的那么幾個人,是不會存在太久的。
一個人的精力和時間是有限的,而探索無邊宇宙和世界奧秘的事業卻是無限的。
這也就注定單打獨斗是走不遠的。
有人能夠站出來,分擔一下他的壓力,陸時羨感到有些欣慰。
“很好,那么文庫制備這塊工作就由鮑勃來負責,梅林你和瑟琳在完成其他步驟之后進行協助就好了。”
接下來的幾天,經過不斷的磨合。
這個四人小團隊才逐漸走入了正軌。
沒辦法,和陸時羨這種以前熟練掌握過的不一樣,在這項技術上,三人幾乎是從頭開始學習。
而且就這還只是前置準備工作,就幾乎花費了一個星期的時間。
“你們之前已經知道在片段化操作中,這個過程是隨機的,因此可能會出現平齊的末端,也有可能出現不平的末端,因此要進行末端修復,將產生的所有的3'或5'突出黏性末端轉化成平末端。”陸時羨正解答著來自鮑勃的問題,
經過對新技術的不斷上手操作,再結合他以前的實驗經歷,彼此碰撞之下,鮑勃產生了一些疑惑。
他的問題是:“末端修復加A堿基很好理解,是為了產生粘性末端,但進行接頭連接全過程都要用到T4DNA聚合酶,讓他有些不解。
這個問題比較基礎,只能說鮑勃之前沒有留意聚合酶的各種作用。
但陸時羨也沒不耐煩,認真的回答道:“那是因為T4DNA聚合酶全程都在起作用,它的原理是不僅能夠從5'至3'方向催化合成DNA,補平5'突出末端,也具有3'至5'外切酶活性,幫助對3'突出末端進行切平,最后將黏性末端DNA片段轉變為平末端DNA。”
緊接著,梅林也貢獻了一個問題。
他頗為疑惑地問道:“我們的樣本里面含有的RNA中最多的是rRNA,如果直接對最后得到的RNA文庫進行測序,那么數據里面可能會存在rRNA的測序數據,這個數據我怕會有一些誤差啊?”
陸時羨不斷在心中點頭。
梅林能想到這一點,足以見到他思維的連貫性。
沒辦法,這個問題確實問的很關鍵,幾乎決定了測序工作成功與否。
而他之前都沒有主動提及這一環,是想著自己親自上手處理時候在說一下的。
但現在既然有人說到這,提前一下也不是不行。
事實上,梅林的判斷還是有些保守了。
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